اختبار تثبيت المتمم Complement fixation test CFT

اختبار تثبيت المتمم (Complement fixation test “CFT):

ما هو المتمم؟ Complement

جهاز يتكون من 20 بروتين تقريباً وتوج مفردة في أمصال جميع الحيوانات ولكن بتركيز عال في خنازير غينيا. و بعضها يفقد نشاطه بالحرارة العالية نسبياً (56ºم) لمدة 30 دقيقة.
وتتميز عناصر المتمم بأنها تنشط بالتفاعلات بين الأنتيجين وأجسامه المضادة لتتفاعل فيما بينها في سلسلة من التفاعلات تنتهي بتكوين مركب يؤدي تدمير جدار الخلايا المحتوية على الأنتيجين.
وتم استغلال هذه الخصائص في تصميم اختبار عال الكفاءة يستخدم لتشخيص عديد من الأمراض الميكروبية يسمى اختبار تثبيت المتمم (CFT).

أساس الاختبار:

في هذا الاختبار يتم الاستناد على تفاعلين بين أنتيجينات وأجسامها المضادة أحدهما ثابت ويستخدم كريات الدم الحمراء الغنمية وأجسامها المضادة (amboceptor)، بالإضافة إلى التفاعل محل الاختبار ويتكون من أنتيجين ميكروب معروف وأمصال حيوانات يراد الكشف عن وجود أجسام مضادة بها لهذا الميكروب.
أما المتمم فيمثله مصل خنازير غينيا. ويجرى الاختبار على مرحلتين بعد تقييم المتمم.
يتم أولاً تسخين أمصال الحيوانات المراد اختبارها عند 56ºم (أكثر لحيوانات المناطق الحارة حتى 60ºم) لمدة نصف ساعة وذلك لتثبيط متممها (يستعيد المتمم نشاطه عند وضع العينات بالبراد ولذا ينبغي التثبيط عند إعادة الاختبار على نفس العينات).
يتم إضافة أحجام ثابتة من الأنتيجين لعينات الأمصال المخففة ثنائياً في محلول فيرونال (Veronal).
يتبع ذلك إضافة المتمم (مصل خنازير غينيا). بعد تحضين 30 دقيقة عند 37ºم أو ليلة في البراد يتم إضافة خليط من كريات حمر غنمية وأجسامها المضادة ثم يتبع ذلك تحضين 30 دقيقة عند 37ºم. تقرأ النتائج حيث يدل عدم تحطم الكريات الحمر على تثبيت المتمم مع التفاعل الأول نتيجة وجود أجسام مضادة للأنتيجين (نتيجة إيجابية) بينما تحطم الكريات الحمر يدل على عدم تثبيت المتمم بالتفاعل الأول لسلبيته وإنما ثبت مع التفاعل الثاني المكون من الكريات الحمر الغنمية وأجسامها المضادة فنشط وأدى إلى تدمير الأنتيجين وهو كرات الدم الحمر. يتم قراءة الاختبار كمياً بتسجيل أعلى تخفيف أدى إلى تثبيت المتمم وعدم تحطيم كريات الدم والتي تظهر في قاع فتحة الطبق على شكل أزرار تاركة المحلول السطحي رائق.
[ads4]

2 ردود

التعليقات مغلقة