Gram stain صبغه جرام

Gram stain

الصبغات الميكروبيه

الصبغه هي عباره عن مواد عضويه تحتوى على عامل ملون وعامل مؤين تسخدم لتحديد انواع البكتيريا واشكالها وتصبغ البكتيريا بعد عمليه الثبيت على شريحه زجاجيه فيتلون الكان الحي الدقيق في الشريحه

اكثر انواع الصبغات انتسارا في مجال الدراسات

١- الصبغات البسيطه:-

تتكون من صبغه واحده تصبغ بها البكتيريا من الامثله ازرق المثلين.

٢- الصبغات التفريقه:-تتكون اكثر من صبغه للتميز بين الانواع المختلفه من المختلفه اشهر هذه الصبغات

(Gram stain )

Gram stain
صبغه جرام

تسخدم هذه الصبغه:-

١-للتفريق بين البكتريا السالبه عن البكتيريا المؤجبه لصبغه جرام.

٢-تساعدنا في دراسه شكال البكتيريا ( كرويه ،عصويه ) وكذلك في تحديد التركيب الخاص بالبكتريا (ثنائي ،مسبحي ،عنقودي )

٣- تساعد في صبغ الفطريات والخلايا القيحيه.

👈👈كيف تصبغ البكتيريا

تاخد البكتريا الموجبه لصبغه جرام اللون البنفسجي الخاص بصبغه الكرستال فيلت.

👈👈وتاخذ البكتيريا السالبه اللون الاحمر الخاص بصبغه السفرانين.

👈👈مبدا عمل الصبغه:-

يعتمد على التفاعل بين جدار البكتيريا والصبغات المكونه لصبغه جرام

في البكتيريا الموجبه لصبغه جرام جدار البكتيريا مكون من ماده معقده من الماغنسيوم والحمض النووي RNA وطبقه سميكه من الببتدوجليكان تدخل اليها الصبغات ويكون مركب معقد من اليود والكرسال فيلت هذا المركب المعقد غير قابل للازاله بواسطه مزيل اللون لذلك تضل محتفظه باللون البنفسجي الخاص بالكرستال فيلت وتظهر باللون البنفسجي

اما البكتيريا السالبه لصبغه جرام فان جدارها يتكون فقط من طبقه واحده من الببتيدواجليكان بالاضافه الى الدهون ولذلك فان الصبغه الخاصه بالكرستال فيليت تزال بواسطه مزيل اللون وتصبح الخليه البكتريه خاليه من اللون و تقبل الصبعه البديله الكرستال فيلت وتصبغ باللون الاحمر

صوره تفرق بين جدار الموجبه والسالبه لصبغه جرام


تجهير شريحه للصبع:-

1- تنظف الشريحه الزجاجيه جيدا بالماء والصابون وتجفف.

٢-تمسك الشريحه من أحدى طرفيها وترسم دائره قطرها ١.٥ سم على الوجه الاسفل من الشريحه.

٣-توضع قطره من الماء على وجه الشريحه المرسوم عليها الدائره بداخلها لغرض عمل لطخه بكتيريه.

٤-تعقم عقده الحلقه

(الوير لوب ) في نهايه الابرة الناقله على لهب موقد بنزن حتى درجه الاحمرار وتبرد لمده ١٠ ثواني.

٥-تؤخذ كميه صغيره من البكتيريا مجرد لمس للمستعمره البكتيريه بواسطه الوب

٦- تخلط البكتيريا مع الماء داخل الدائره على سطح الشريحه.

٧-تترك لتجف قريب من اللهب.

٨-بعد ان تجف العينه تثبت باستخدام اللهب او باستخدام ميثانول مركز.

٩- عند الثبيت باللهب تمرر الشريحه بسرعه ثلاث مرات فوق اللهب واذا استخدمة الميثانول يترك لمده دقيقتين.

اصبحت جاهزه للصبغ.

👈👈هناك طريقتين لتثبيت اللطخات البكتريه

١-باستخدام الميثانول المركز.

٢- بتمرير اللطخه البكتريه الجافه على لهب.

👈👈لماذا يستخدم الكحول في تثبت الطخات اللعينات المحتمل احتوئها المحتويه على بكتريا النسيريا بوعيها(gonococci or meningococci)

وذلك لان بكتيريا النسيريا تشخص ( Intracellular )داخل الخلايا القيحيه لذلك لذلك تثبت بتغطيه الشريحه بالميثانول لمده دقيقتين للمحافظه على الخلايا القيحيه من ان تتحطم بالهب عند تعرضها للهب.

ايضا بالنسبه لبكتريا T.B ايضا نثبت الشريحه بواسطه الميثانول لمنع تطاير العصيات الذي يمكن ان تستنشق وتسبب العدوى (لان الهب يعمل تطاير droplet ) تؤدي الى انتقال العدوى.

🔍دائما تاكد من كل الصبغات الجديده انها تعمل قبل الصبغ وذلك من اجل ضبط جوده الصبغ الحصول على نتائج دقيقه وموثوقه كما ذكرنا سابقا في موضوع ضبط الجوده الخاص بالصبغات.

👈بعد التاكد من ان الصبغه فعاله نبدا عمليه الصبغ

صبغ الشريحه باستخدام صبغه جرام

نرتب الصبغات بحسب تسلسل الصبغ:-

١-كرستال فيليت.

٢-ليوجلس ايودين.

٣- اسيتون الكحول.

٤-سفرانين.

بعد ترتيب الصغبه نبدا عمليه الصبغ

١- نضع الشريحه على الحامل الخاص بالصبغ وتغطى اللطخه بصبغه الاولى الكرستال فيلت (الاساسيه ) وتترك لمده من نصف دقيقه دقيقه واحده.

٢- تغسل اللطخه بالماء وتغطى بالصبغه الثانيه ليوجل ايودين

الصبغه( المثبته )ويترك لمده من نصف دقيقه الى دقيقه.

٣- تغسل الشريحه بالماء وتغطى استون الكحول وهو (مزيل اللون) لمده ١٠ ثواني.

٤- تغسل الشريحه بسرعه بعد انتهاء الوقت ويضاف الصبغه الاخيره السفرانين (الصبغه

البديله) وتترك لمده دقيقتين.

٥- تغسل الشريحه بالماء وتترك لتجف.

٦- بعد ان تجف نضع قطره من الزيت وتدرس تحت العدسه ١٠٠ x

ماهو المتوقع رويته تحت المجهر

🔍البكتيريا الموجبه لصبغه جرام 👈تظهر بالون البنفسجي الغامق.

🔍البكتيريا السالبه لصبغه جرام 👈تظهر باللون الاحمر.

🔍الخمائر👈 تظهر باللون البنفسجي الغامق.

🔍الخلايا الطلائيه 👈تظهر باللون احمر فاتح.

🔍انويه الخلايا القيحيه 👈تظهر باللون الاحمر.

فيديو يوضح طريقه اعداد اللطخه البكتيريه وطريقه الصبغ


كتابه التقرير

يتظمن التقرير :-

١-عدد البكتيريا الموجوده (many moderate few or scanty )

٢-تفاعل البكتيريا مع الصبغه (Gram positive or gram negative )

٣-شكل وترتيب البكتيريا (cocci diplocci streptococci rod coccobacilli) وكذالك في ما اذا كان داخل الخلايا (intracellular )

٤-وجود الخلايا القيحيه وعددها

٥- وجود وعدد الخمائر والخلايا الطلائيه.

Gram positive cocci. فوق خليه طلائيه لونها وردي فاتح والبكتريا لونها بنفسجي


Gram positive cocci موجوده مع انويه خلايا قيحيه لونها حمرغامق لا حظ الفرق البكتيريا الموجبه لصبغه جرام


Gram negative bacilli


Gram positive cocci


Gram positive bacilli


الاخطاء المرافقه لعمليه الصبغ

⚙⚙ما هي الاخطاء التي تجعل البكتيريا الموجبه لصبغه جرام تضبغ بالون الاحمر الخاص؟؟؟؟؟ بالسالبه :-

١-حدوث تحطم لجدار البكتيريا الموجبه لصبغه جرام بسبب التعرض للحراره لفتره طويله خلال عمليه الثبيت.

٢- ترك مزيل اللون استون الكحول على الشريحه لفتره طويله وعدم اللتزام بفتره الصبغ المحدده وهي ثواني قليله.

٣- استخدام لوجلس ايودين قديم وحدث له تحول في لونه من اللون البني الى اللون الاصفر اذا تحول لونه الى الاصفر اصبح غير فعال من شروط الحفظ الجيد للصبغات تحفظ في حاويات معتمه او زجاجيات بنيه اللون وبعيده عن الضؤ كما ذكرنا في ضبط الجوده الخاص بالصبغات.

٤- ان تكون اللطخه البكتريه حضرت من وسط زراعي قديم له اكثر من٢٤ ساعه.

⚙⚙ماهي الاخطاء التي تؤدي الى ان البكتيريا السالبه لصبغه جرام تظهر بلون ازرق موجبه؟؟؟؟؟ اخذ كميه كبيره من البكتيريا خلال عمل الطخه البكتيريه مما يؤدي العدم قدره مزيل اللون على النفاذ الي الطبقه السميكه من البكتيريا وبالتالى لا يحده ازله كامل للون في حاله البكتيريا السالبه لصبه جرام( لذلك يجب ان يكون كميه البكتيريا الماخوذه لعمل الطخه البكتيريه مجرد لمس للمستعمره فقط).

109 ردود
« Older Comments

Trackbacks & Pingbacks

« Older Comments

التعليقات مغلقة